多肽
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肽(peptide)是α-氨基酸以肽鏈連接在一起而形成的化合物，它也是蛋白質水解的中間產物。
一般肽中含有的氨基酸的數目為二到九,根據肽中氨基酸的數量的不同,肽有多種不同的稱呼:由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理類推還有三肽、四肽、五肽等,一直到九肽。通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于10，000Da（Dalton，道爾頓），能透過半透膜，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀。也有文獻把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽；由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質,換言之,蛋白質有時也被稱為多肽。
多肽也簡稱為肽，是20世紀被發現的。多肽有生物活性多肽和人工合成多肽兩種。生物提取的多肽具有很強的活性，所以叫做活性肽！只有活性的肽才能對人體產生很好的效果!但是人工合成的多肽有很多是沒有活性的，是需要篩選的，只有活性肽才能被人體安全使用！
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肽對人體有什么影響？
活性肽主要控制人體的生長、發育、免疫調節和新陳代謝，它在人體處于一種平衡狀態，若活性肽減少后，人體的機能發生重要變化，對于兒童來說，他的生長、發育變得緩慢，甚至停止，長久下去就形成了侏儒，對成年人或老年人，缺少活性肽后，自身的免疫力就會下降，新陳代謝紊亂，內分泌失調，引起各種疾病的產生，如失眠、身體消瘦或浮腫。由于活性肽還作用于神經系統，因此人體就會變得動作遲緩，頭腦不再聰慧，更主要的是活性肽減少，直接引起人身體各部位逐漸出現全面衰老，引發各種疾病.
人體活性肽有哪幾個分泌周期？
在不同的年齡時期，各種活性肽的分泌量也有很大差別，按分泌量劃分，人的一生一般可分為：
①分泌充足期（25歲以前的青年期）這個時期內分泌量均衡、免疫功能強勁，人體一般不易出現疾病；
②分泌不足期（失衡期）（30—50歲壯年和中年期）這一時期如果活性肽分泌不足或失衡會出現各種相關的亞健康狀態和輕微疾病癥狀（40歲以上的人群常見）；
③分泌匱乏期（嚴重不足期）（50歲以上中年和老年期）這一時期嚴重如果活性肽嚴重不足和嚴重失衡，可能出現非常突出的衰老癥狀，或會引起各種相關疾病發生（50歲以上人群比較明顯）；
④分泌終止期（衰老期），這一時期很短，由于控制人體內分泌的“司令官”活性肽不分泌或分泌減少，從而導致細胞功能衰退，引發器官功能衰竭和喪失，最后導致生命終結。
多肽
由多個分子α-氨基酸的-NH2與-COOH互相縮合失水后形成10個肽鍵(-CONH-)以上的長鏈化合物。它包括多種在人的機體中具一定生理活性的化合物，可以從動物組織中提取，也可能人工合成。蛋白質即是以各種氨基酸按一定順序以肽鍵形成的長鏈肽，通過多種次級鍵交聯結合而成的高分子化合物，蛋白質具有復雜的四級結構，通過不同程度的水解，破析結構可得包括多肽等的產物：蛋白質→蛋白脈(proteose) →蛋白胨(peptone) →多肽→寡肽(oligopeptide,2～10個肽鍵的長鏈肽) →氨基酸。這同時也表明了蛋白質的合成途徑。因此，借人工合成多肽，不僅可用于生化制藥工業，還可用來研究闡明蛋白質的合成途徑及其結構。
人體很多活性物質都是以肽的形式存在的，經研究發現人體干重的70%以上都是蛋白質，所以說沒有肽，就沒有活性，就沒有生命。肽涉及人體的激素、神經、細胞生長和生殖各領域，其重要性在于調節體內各個系統和細胞的生理功能，激活體內有關酶系，促進中間代謝膜的通透性，或通過控制DNA轉錄或影響特異的蛋白合成，最終產生特定的生理效應。肽是涉及人體內多種細胞功能的重要物質。肽可以合成細胞，并調節細胞的功能活動。肽在人體作為神經遞質，傳遞信息。肽可在人體作為運輸工具，將人體所食的各種營養物質與各種維生素、生物素、鈣及對人體有益的微量元素輸送到人體各細胞、器官和組織。肽是人體重要的生理調節物，它可全面調節人體生理功能，增強和發揮人體生理活性，它具有重要的生物學功能。肽對人的細胞活性、功能活動、生命存在太重要了。但現代人因各種因素使人體中的肽流失、損失，合成肽的能力大大減弱，因此現代人體缺乏肽，必須補充人工合成肽，補肽就是補活性，補肽就是補活力，補肽就是補生命。（摘自 酶法多肽專家鄒遠東教授 《酶法多肽論》）
多肽的保存
多肽類保健食品只需置于陰涼干燥處即可。
對于多肽試劑和多肽類藥物則需要保存在干燥器中。在將它們暴露于空氣之前， 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少，當無法冷凍干燥時，最好的方法是以小的工作樣量存放。對于含Cys, Met orTrP的多肽試劑，脫氧緩沖劑對其溶解必不可少，因為這種多肽試劑可易空氣氧化，在封瓶前，慢慢流過多肽試劑的氮氣或氬氣也會降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽試劑也容易降解，所有這些肽與不含這些有問題解苷的那些肽相比，生命期有限。
多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問題是形成二級結構。除了最太肽外，這點都會發生， 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會促進二級結構形成。我們建議先在無菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率， 可用聲處理。溶解仍有問題， 加少量稀乙酸（10%）或氨水，會便于溶解。
要長期保存多肽試劑， 最好冷凍干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無降解。溶液中的多肽遠不穩定。 多肽易受細菌降解，應用無菌純化水溶解。
含有Met, Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化，壽命有限。應溶于無氧溶劑， 為防止重復凍融的破壞， 建議溶解過量的肽的便實驗，其余多肽以固體形成保存。
多肽的溶解性
大多數肽的首選溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽， 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle來溶解，這些溶劑可能某些實驗有副作用。所以我們建議設計多肽時要加注意。
殘基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。
多肽的生產方法
隨著科技的發展，生產肽的方法也在不斷發展。
1. 五六十年代，主要是從動物臟器獲取肽。
如胸腺肽，其生產方法是將剛生下來的小牛宰殺之后，割下其胸腺，然后用震蕩分離的生物技術，將小牛胸腺中的肽震蕩分離出來，制
成胸腺肽針劑。這種胸腺肽主要用于人體免疫。目前，這種肽已處于淘汰狀態。因現在世界上流行“瘋牛病”，這種病毒主要吞噬動物大腦中的蛋白質，破壞其腦組織、細胞及神經。人體一旦染上此病毒，比患上癌癥還可怕，最終成為“植物人”或很快死亡。還有從人體血液中提煉出來的肽 ，其副作用也很大，它不僅容易使人體染上甲肝、乙肝、丙肝、丁肝、艾滋病毒、性病病毒，而且有排異過敏反應，這種反應一旦出現，生命就危在旦夕。
2. 固相合成法、液相合成法生產的肽。
用這種方法生產肽的企業在美國硅谷就有一家。他們主要是購買世界上一些精細化工廠生產的氨基酸為原料定向合成某種單肽，屬醫藥原料中間體，主要用于西藥配方，以增強藥效、增強人體對藥的吸收速度和吸收率。
3. 酸解法或堿解法生產的多肽。
這種肽主要出現在日本。用酸解法生產的“大豆多肽”，屬“食品添加劑”，主要用于老人和兒童食品，其目的是增強這兩種人群對食品營養的吸收。現在，世界上擁有“大豆多肽”的國家只有日本和中國。但其所用的原料、水解法和產品性質大有不同。日本所用原料是豆粕，水解方法是酸法，生產的肽酸性化學物質難以除盡，而且有苦味，需用活性炭吸附、脫苦，而活性炭免不了會侵入肽體。
4. 酶法生產的生物活性肽。
酶法生產的生物活性肽。這種肽主要產在中國，代表著當今世界肽研究、開發、生產、創新的水平和潮流。酶法生產的生物活性肽是用人體所需要的食品級植物蛋白酶，將人體平常所食的食物蛋白質酶解成小分子活性多肽。它具有極強的生物活性和多樣性，已在世界范圍內引起關注，成為當今世界追崇的熱點。如武漢九生堂生產的“大豆多肽”，所用原料是含量在90%以上的大豆分離蛋白，水解方法是酶法，所用的酶屬食品級植物蛋白酶。生產的“大豆多肽”無苦味，且風味芳香宜人，對人體無任何毒副作用。產品屬終端產品，被中國創新基金列為無償資助項目，現在已實現工業化生產，其終端產品“大豆多肽”口服液是世界上第一個用酶法生產的大豆多肽終端產品，在第89屆廣交會上受到世界客商的青睞。
多肽的合成
具體合成由下列幾個循環組成：
一、去保護：
Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去 除氨基的保護基團。
二、激活和交聯：
下一個氨基酸的羧基被一種激活劑所激活。激活的單體 與游離的氨基反應交聯，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反 應完成。循環：這兩步反應反復循環直到合成完成。 洗脫和脫保護：多肽從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑（TFAl） 洗脫和脫保護。
HPLC分析和純化
分析HPLC使用柱子和泵系統，可以經受傳遞高壓，這樣可以用極細的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在幾分鐘內高度被分析。
HPLC分兩類：離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸組成表現出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用，通過可變PH， 離子強度， 或兩者洗脫出多肽，通常， 先用低離子強度的溶液，以后逐漸加強或一步一步加強，直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個例子使用強陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來分離。
反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上，用降低離子強度洗脫， 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價吸附到硅上的碳氫烷鏈構成，這種鏈長度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長鏈柱比短鏈對小的， 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而，總體實踐中， 這兩類柱互變無多少顯著差別，別類載體由碳水化合物構成， 比如苯基。
典型的操
作常由兩綬沖劑組成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)
大量各種緩沖劑含許多不同試劑，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨，TFA/TEA，磷酸鈉或鉀，異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑，但要注意一點：硅反相柱料不能長時間暴露于高pH，甚至微堿pH， 因為這樣會破壞柱子。
不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%， 而肽含量相關帶電基團（如Arg, Lys ）的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。
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